mRNA轉染的優(yōu)勢

1. 高效且可控的表達：mRNA能迅速翻譯為蛋白質，表達短暫且可控，降低過度表達風險。
2. 細胞友好：mRNA引入細胞內不易造成損傷。
3. 安全性與低免疫原性：mRNA不整合入宿主基因組，降低基因突變風險，降解產(chǎn)物為細胞自然成分。
4. 快速響應與靈活性：mRNA快速合成能力使科學家能迅速調整實驗方案。

IVT的主要步驟

模板制備

• 以質粒DNA為起點，通過瓊脂糖電泳鑒定質粒。
• 選擇超螺旋狀態(tài)最佳的菌株，進行線性化質粒，選擇合適的限制性內切酶（如BsaI）進行切割。

酶法加帽

• IVT后，使用牛痘病毒加帽酶和mRNA 2'-O-甲基轉移酶為mRNA加帽，增強穩(wěn)定性。

轉錄反應

• 準備線性化質粒模板，加入轉錄緩沖液、NTPs和RNA聚合酶，在37°C孵育合成大量mRNA。

純化

• 采用柱純化、磁珠純化或酚/氯仿純化等方法，去除雜質，提取純凈的mRNA。

定量與檢測

• 使用紫外吸收法、染料法或毛細管電泳法對mRNA進行定量和純度檢測。

共轉錄法加帽

• 為提高效率，可在IVT過程中直接加入帽子類似物，實現(xiàn)轉錄與加帽同步進行。

 IVT的主要試劑

轉染試劑選擇

ProteanFect

• 首·款基于蛋白遞送的轉染試劑，非常適合mRNA轉染。
• 在多種難轉染細胞系中效率顯著優(yōu)于lipofectamine。

ProteanFect在難轉細胞中的應用

• 在Jurkat T細胞中，ProteanFect展現(xiàn)出對多種類型核酸的高效遞送能力。